顯微計數(shù)法是將一定體積的供試液濾過，使所含不溶性微粒截留在微孔濾膜上，在100倍顯微鏡下，用經(jīng)標(biāo)定的目鏡測微尺分別測定其最長直徑在10μm以上(≥10um)和25μm以上(≥25um)的微粒，根據(jù)過濾面積上的微粒總數(shù)，計算出被檢測的供試液每1ml(或每個容器)中含不溶性微粒的數(shù)量。
1、操作的實驗環(huán)境、儀器和用具
(1) 實驗環(huán)境 顯微計數(shù)法不溶性微粒儀的實驗操作所處環(huán)境應(yīng)不得引入外來微粒，可以在超凈室、層流凈化臺或能符合要求的潔凈實驗室中進(jìn)行。玻璃儀器和其他所需的用品都應(yīng)潔凈。顯微計數(shù)法所用微粒檢查用水(或其他適宜溶劑)，使用前須經(jīng)不大于1.0μm的微孔濾膜濾過。
(2) 顯微鏡 雙筒大視野顯微鏡，目鏡內(nèi)附標(biāo)定的測微尺(每格5～10um)。坐標(biāo)軸前后、左右移動范圍均應(yīng)大于30mm，顯微鏡裝置內(nèi)附有光線投射角度、光強度均可調(diào)節(jié)的照明裝置。檢測時放大100倍。
(3) 鏡臺測微尺(用于目鏡測微尺的標(biāo)定)。
微孔濾膜 白色，孔徑0.45μm、直徑25mm(或13mm)，一面印有間隔3mm的格柵；膜上如有10μm以上(≥10um)的不溶性微粒，應(yīng)在5粒以下，并不得有25μm以上(≥25um)的微粒，必要時，可用微粒檢查用水沖洗使符合要求。
(4) 直徑25mm(或13mm)夾式定量濾器。
(5) 平皿。
(6) 平頭無齒鑷子。
(7) 計數(shù)碼器。
2、顯微計數(shù)法不溶性微粒儀的操作方法
(1) 供試品檢查前的準(zhǔn)備
(2) 取50ml微粒檢查用水(或其他溶劑)，經(jīng)微孔濾膜(一般孔徑為0.45μm)濾過，置于潔凈的適宜容器中，旋轉(zhuǎn)使可能存在的微粒均勻，靜置待氣泡消失。按顯微計數(shù)法項下的檢查法檢查，每50ml中含10μm以上(≥10um)的不溶性微粒應(yīng)在20粒以下，含25μm以上(≥25um)的不溶性微粒應(yīng)在5粒以下。否則表明微粒檢查用水(或其他溶劑)、玻璃儀器和實驗環(huán)境不適于進(jìn)行微粒檢查，應(yīng)重新進(jìn)行處理，檢測符合規(guī)定后放可進(jìn)行供試品檢查。
(3) 用水沖洗平皿，再用凈化水反復(fù)沖洗，瀝干，置實驗環(huán)境中備用。
(4) 在凈化臺上，將濾器用凈化水沖洗至潔凈，用平頭無齒鑷子夾取2.4項下符合要求的測定用微孔濾膜置濾器托架上，用濾器夾固定濾器，倒置，反復(fù)用凈化水沖洗濾器內(nèi)壁，瀝干后安裝在抽濾瓶上備用。
(5) 待檢樣品應(yīng)事先除去外包裝，并用凈化水將容器外壁沖洗干凈，置適宜實驗環(huán)境中備用。
(6) 檢查法
標(biāo)示裝量為25ml或25ml以上的靜脈用注射液或注射用濃溶液 除另有規(guī)定外，取供試品，用水將容器外壁洗凈，在層流凈化臺上小心翻轉(zhuǎn)20次，使溶液混合均勻，立即小心開啟容器，用適宜的方法
(7) 抽取或量取供試品溶液25ml，沿濾器內(nèi)壁緩緩注入經(jīng)預(yù)處理的濾器(濾膜直徑25mm)中，靜置1分鐘，緩緩抽濾至濾膜近干，再用微粒檢查用水25ml，沿濾器內(nèi)壁緩緩注入，洗滌并抽濾至濾膜近干，然后用平頭無齒鑷子將濾膜移置平皿上(必要時，可涂抹極薄層的甘油使濾膜平整)，微啟蓋子使濾膜干燥后，將平皿閉合，置顯微鏡載物臺上。調(diào)好入射光，放大100倍進(jìn)行顯微測量，，調(diào)節(jié)顯微鏡至濾膜格柵清晰。移動坐標(biāo)軸，分別檢測有效過濾面積上最長粒徑在大于10μm(≥10um)和25μm以上(≥25um)的微粒數(shù)。另取至少兩個供試品，同法測定，計算測定結(jié)果的平均值。
(8) 標(biāo)示裝量為25ml以下的靜脈用注射液或注射用濃溶液 除另有規(guī)定外，取供試品，用水將容器外壁洗凈，在層流凈化臺上小心翻轉(zhuǎn)20次，使混合均勻。立即小心開啟容器，用適宜的方法直接抽取容器中的全部溶液，沿濾器內(nèi)壁緩緩注入濾器(濾膜直徑13mm)中，照上述3.2.1同法測定。
(9) 靜脈注射用無菌粉末及供注射用無菌原料藥 除另有規(guī)定外，照光阻法檢查法3.2.3或制備供試品溶液，同3(2)操作測定。
3、記錄與計算
(1) 記錄 顯微計數(shù)法不溶性微粒儀的記錄應(yīng)包括所用儀器型號；供試品包裝情況，檢驗數(shù)量；測定用濾膜處理前后微粒水平，微粒檢查用水來源或制備情況與含微粒數(shù)。
(2) 計算 用手撳計數(shù)碼器分別統(tǒng)計濾膜上直徑10μm以上(≥10um)的微粒數(shù)，以及25μm以上(≥25um)的微粒數(shù)，計算，即得每1ml供試品溶液(或每個容器或每份供試品)中所含10μm以上(≥10um)和25μm以上(≥25um)的不溶性微粒數(shù)。
4、注意事項
(1) 各種形狀的微粒應(yīng)以實測到的最長粒徑計算，重疊微粒和聚合膠體微粒均以單個微粒計數(shù)；結(jié)晶析出不屬于檢測范圍，故不應(yīng)計算。
(2) 必要時另取微粒檢查用水(或其他溶劑)25ml照3.2.1項下自“沿濾器內(nèi)壁緩緩注入，洗滌并抽濾至濾膜近干”起，依法操作，此項空白試驗僅可視作對操作環(huán)境、實驗用具的認(rèn)證，所得數(shù)據(jù)不必在供試品檢查結(jié)果中扣除，但對檢測結(jié)果的正確與否有密切關(guān)系。此項試驗必須檢測全濾膜，達(dá)到3(1)的要求后方可進(jìn)行樣品檢測。
(3) 顯微計數(shù)法不溶性微粒儀檢測法不適用于乳液型和混懸型注射劑，對于黏度過高者，光阻法和本法均無法測定時，可用適宜的溶劑經(jīng)適量稀釋后測定。
(4) 供試品的檢查數(shù)量：為確保檢查結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)意義，除另有規(guī)定外，一般應(yīng)取供試品3瓶(支)以上進(jìn)行不溶性微粒檢查。
5、結(jié)果與判定
(1) 標(biāo)示裝量為100ml或100ml以上的靜脈用注射液 除另有規(guī)定外，每1ml中含10μm以上(≥10um)的微粒不超過12粒，含25μm以上(≥25um)的微粒不超過2粒，判為符合規(guī)定。
(2) 標(biāo)示裝量為100ml以下的靜脈用注射液、靜脈注射用無菌粉末、注射用濃溶液及供注射用無菌原料 除另有規(guī)定外，每個供試品容器中含10μm以上(≥10um)的微粒不超過3000粒，含25μm以上(≥25um)的微粒不超過300粒，判為符合規(guī)定。
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更新時間：2024-10-26 
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